Исследования на сап лошадей

Сап (malleus) – инфекционная болезнь однокопытных животных, характеризующаяся лихорадкой, истощением и развитием в паренхиматозных органах, чаще в легких, на слизистых оболочках и коже сапных узелков и язв.

Этиология. Возбудитель болезни – Actinobacillus mallei, грамотрицательная, короткая, неподвижная, не образующая спор и капсул палочка с округленными краями бактерия. Во внешней среде малоустойчива. Культуры бактерии сапа выращивают на обыкновенных нейтральных питательных средах, содержащих 5% глицерина. Дезосредства в обычных концентрациях губительно действует на возбудителя. Антибиотики и сульфаниламидные препараты также губительно действуют на сапных бактерий.

Эпизоотологические данные. Восприимчивы лошади, ослы, мулы, лошаки, реже болеют верблюды и хищные животные (в зоопарках). Болеет и человек. Источником возбудителя инфекции являются больные животные, в том числе лошади с хроническим и латентным сапом, не имеющие клинических признаков. Факторами передачи являются контаминированные корм, воду, навоз, подстилку, сбрую и др. Воротами инфекции служат пищеварительный тракт (носоглотка, кишечник), реже органы дыхания, поврежденная кожа и слизистая оболочка половых путей. Болезнь проявляется спорадически или в виде эпизоотических вспышек. Сап среди восприимчивых животных распространяется сравнительно медленно, так как при хроническом течении, особенно при латентной форме, возбудитель не всегда выделяется во внешнюю среду. При тесном размещении лошадей в плохо вентилируемых конюшнях, а также при пастбищном содержании болезнь может за короткое время охватить значительное поголовье животных.

Инкубационный период при естественном заражении не превышает 2-3 недель, при экспериментальном – 2-5 дней. Течение острое, хроническое и латентное. Различают легочную, носовую и кожную формы сапа.

Для острого течения характерны повышения температуры тела до 41-42 °С, сильное угнетение, покраснение слизистых оболочек носа и глаз, пульс слабый, частое дыхание. Через 2-8 дней на слизистой оболочке носа образуются мелкие узелки желтоватого цвета с красным ободком. Узелки некротизируются и образуются язвы с неровными краями. Появляется истечение из носа.

Подчелюстные лимфатические узлы увеличиваются в объеме, становятся плотными, бугристыми, неподвижными. Иногда поражается кожа на внутренней поверхности бедер, голове, шее, препуции (образуются узлы и язвы). Острое течение сапа длиться 8-30 дней, заканчивается смертью животного или принимает хроническое течение.

При хроническом течении болезнь длится от нескольких месяцев до нескольких лет, часто протекает незаметно. На слизистой оболочке носа обнаруживают рубцы звездчатой формы, возникающие на месте заживших язв. При кожной форме сапа на тазовых конечностях иногда развиваются утолщения (слоновость). При хроническом сапе периодически наступают рецидивы.

Латентную форму наблюдают в стационарно неблагополучных пунктах, которая протекает в течение многих лет без проявления клинических признаков.

Патологоанатомические изменения. В легких и других паренхиматозных органах узелки серо-белого цвета с красным поясом, иногда очаги бронхопневмонии и некроза. На слизистой носа узелки, язвы или рубцы. Регионарные лимфатические узлы увеличены, содержат обызвествленные узелки или очаги некроза.

Диагноз. Учитывают эпизоотологические, клинические патологоанатомические, гистологические данные, проводят аллергическое, серологическое и бактериологическое исследования. Применяются глазная и значительно реже подкожная маллеинизация.

Дифференциальный диагноз. Сап лошадей необходимо дифференцировать от мыта, эпизоотического лимфангита. Основной метод дифференциальной диагностики сапа лошадей лабораторный и глазная маллеинизация.

С целью профилактики заболевания, всех взрослых лошадей исследуют на сап офтальмомаллеинизацией за 2 недели до передачи другим хозяйствам, отправки на выставки, спортивные состязания, а также до убоя на мясо подвергают клиническому исследованию на сап и маллеинизации. Все поголовье однокопытных животных во всех категориях хозяйств подвергают клиническому осмотру на сап и маллеинизации один раз в год.

При установлении диагноза на сап хозяйство (ферму) объявляют неблагополучной и накладывают карантин. Запрещают передачу однокопытных животных другим хозяйствам, вывоз фуража, перегруппировку лошадей внутри хозяйства, а также убой восприимчивых животных на мясо. Животных с характерными для сапа клиническими признаками, а также не имеющих клинических признаков болезни, но положительно реагирующих на маллеин, признают больными, немедленно изолируют и уничтожают вместе с кожей (трупы сжигают), остальных лошадей карантинного отделения убивают на санитарной бойне на мясо.

Животных, подозреваемых в заражении, через каждые 15 дней исследуют на сап методом глазной маллеинизации до получения трехкратных отрицательных результатов по всей группе. Карантин снимают через 2 месяца после убоя больных и бывших с ними в контакте животными и получения отрицательных результатов исследовании на сап.

Исследования на сап лошадей

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Лабораторная диагностика сапа

Дата введения: с момента утверждения

1. Методические указания разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю.В.Демина, Н.Д.Пакскина); ФГУЗ “Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт” Роспотребнадзора (В.И.Илюхин, В.В.Алексеев, Н.П.Храпова, В.А.Антонов, Т.В.Сенина).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 14 января 2011 г.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1. Область применения

1.1. Методические указания предназначены для специалистов как в системе органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, так и в системе лечебно-профилактических организаций независимо от их организационно-правовой формы и формы собственности.

1.2. В методических указаниях определены порядок забора, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных и умерших людей, животных с подозрением на сап, материала из объектов окружающей среды, подозрительного на контаминацию возбудителем данного заболевания.

2. Нормативные ссылки

2.1. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.1285-03 “Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)”. М., 2003.

2.2. Санитарные правила СП 1.2.036-95 “Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности”. М., 1996.

2.3. МУ 1.3.1794-03* “Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности”. М., 2004.
_______________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют МУ 1.3.2569-09. – Примечание изготовителя базы данных.

2.4. МУК 4.2.1890-04 “Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам”. М., 2004.

2.5. МУ 3.5.5.1034-01* “Обеззараживание биологического материала и объектов внешней среды, зараженных бактериями I-IV групп патогенности, при исследованиях методом ПЦР”. М., 2001.
_______________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют МУ 1.3.2569-09. – Примечание изготовителя базы данных.

2.6. Методические рекомендации “Лабораторная диагностика, лечение и профилактика сапа”. Волгоград, 1995.

2.7. Практическое руководство “Специфическая индикация патогенных биологических агентов”. М., 2006.

2.8. Практическое руководство “Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней”. М., “Медицина”, “Шико”, 2009.

Список сокращений

гуаниновые и цитидиновые нуклеотиды

жидкая минимальная среда с антибиотиками

мясо-пептонный агар (бульон) с глицерином

минимальная подавляющая концентрация

метод флуоресцирующих антител

нормальная кроличья сыворотка

нормальная лошадиная сыворотка

нитроцеллюлозная мембрана (фильтр)

показатель повреждения нейтрофилов

полимеразная цепная реакция

реакция непрямой гемагглютинации

реакция связывания комплемента

реакция торможения непрямой гемагглютинации

твердофазный иммуноферментный анализ (метод)

триптиказосоевый агар (бульон)

фосфатный буферный раствор + Твин-20

цитратно-фосфатный буферный раствор

3. Общие сведения

Сап – зоонозная инфекция, протекающая у человека в острой септической и хронической формах со специфическими поражениями кожи, слизистых оболочек, мышц, суставов и внутренних органов.

Основным резервуаром инфекции в естественных условиях являются преимущественно однокопытные – лошади, ослы, мулы, а также верблюды и дикие хищники семейства кошачьих. В настоящее время сап у лошадей отмечается в Монголии, Турции, Иране, Ираке, Китае, Индии, Индонезии и на Филиппинах. В России существует опасность заноса инфекции из-за рубежа.

Источником инфекции для людей служат животные, обычно лошади. Заражение происходит через выделения больного животного: носовой секрет и отделяемое кожных язв, реже содержимое кишечника, моча, молоко. Восприимчивость людей к сапу оценивается неоднозначно. С одной стороны, в начале прошлого века количественное соотношение больных лошадей и имевших к ним отношение людей измерялось как 200-400 к 1, на основании чего делался вывод о высокой видовой устойчивости человека к этой инфекции. С другой стороны, соотношение хронических и острых форм заболевания у лошадей составляет 9:1, а среди людей -1:1, что предполагает более высокую чувствительность людей к сапу. Основной путь заражения в естественных условиях – контактный (80% случаев) через кожу верхних и нижних конечностей, лица и шеи, значительно реже через слизистые оболочки верхних дыхательных путей и конъюнктиву глаз. Фактически сап является профессиональной болезнью. В прошлом сапом заболевали конюхи, ветеринары, работники конских боен.

Описаны случаи внутрилабораторных заражений ветеринарных и медицинских работников, известны случаи заболевания после повреждения кожи при вскрытии трупов больных сапом. Считается, что аэрозоли культур высоко инфекциозны для человека. Большинство описанных случаев заражения сапом в лабораторных условиях связано с проникновением возбудителя через дыхательные пути. При анализе профессиональных случаев заболеваний микробиологов, работающих с особо опасными инфекциями, В. mallei ставят в один ряд с возбудителями чумы и туляремии. В последнее время описаны 2 случая внутрилабораторного заражения (по одному в США и в России), в одном случае заболевание закончилось летальным исходом, в другом – потребовало длительного комплексного лечения химиопрепаратами. Передача от человека к человеку спорна, хотя в литературных источниках начала XX века описаны отдельные случаи таких заражений – при уходе за больными людьми и животными без специальных мер предосторожности.

Возбудитель сапа Burkholderia mallei относится к патогенным представителям рода Burkholderia (выделен в автономную таксономическую единицу в 1992 г. из представителей 2-й группы рРНК-ДНК гомологии обширного таксономически аморфного рода Pseudomonas), вызывает тяжелое инфекционное заболевание у человека и довольно широкого круга животных. В экспериментальных условиях наиболее чувствительными к сапу животными являются кошки, золотистые хомячки и морские свинки. Кролики мало восприимчивы к сапу. Белые мыши и крысы – высокорезистентны.

Возбудитель сапа – неподвижная (атрих) тонкая полиморфная палочка, прямая или несколько изогнутая, с закругленными концами, размером 0,4х3-5 мкм. Наряду с типичными клетками могут встречаться очень короткие коккобациллярные (в молодых культурах), булавовидные и ветвящиеся формы (в старых культурах). Спор и капсул возбудитель сапа не образует.

В. mallei относительно устойчива во внешней среде: в подсохших выделениях больных микроб сохраняет жизнеспособность до трех месяцев, в воде и различных гниющих субстратах – до месяца. При нагревании взвеси чистой культуры возбудитель сапа погибает при 60 °С через 2 ч и более, при кипячении – в течение нескольких минут. Хлорная известь (2% раствор) вызывает гибель В. mallei через несколько мин, 1% едкий натр – через 1 ч.

Возбудитель сапа обладает устойчивостью к пенициллинам, полимиксинам, ванкомицину, хиноксидину и диоксидину, что используется в качестве дифференциального теста.

4. Материал для исследования, отбор и транспортирование проб

Вся работа с исследуемым материалом, подозрительным на зараженность возбудителем мелиоидоза, проводится в соответствии с требованиями по безопасности работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (санитарными правилами СП 1.3.1285-03 “Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)” и СП 1.2.036-95 “Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности”, а также методическими указаниями МУ 1.3.2569-09 “Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности”).

Идентификация возбудителя сапа предусматривает выделение возбудителя (или антигенов) из объектов исследования и определения специфических антител в крови людей и животных. Схема и последовательность бактериологических и иммунологических этапов представлены ниже (рис.1).

Рис.1. Этапы идентификации Burkholderia mallei

Рис.1. Этапы идентификации Burkholderia mallei

Примечание: Постановка, оценка реакций и расшифровка сокращений по тексту.

Исследование на сап начинается одновременно бактериологическим, биологическим и серологическим методами. С момента поступления материала проводят бактериоскопию мазков в световом и люминесцентном микроскопах, бактериологическое исследование, направленное на выделение культуры сапного микроба, биологическое исследование, как дополнительное для выделения “чистой” культуры, и серологическое исследование нативного материала для выявления видоспецифического антигена или специфических антител.

Материалом для исследования от людей и животных с подозрением на сап могут быть выделения из носа, отделяемое язв, пунктаты лимфоузлов, мокрота, испражнения. Материал по возможности должен быть исследован до начала лечения химиотерапевтическими препаратами.

При вскрытии трупов животных берут для анализа кусочки органов (селезенка, печень, легкое), лимфатических узлов, кровь, костный мозг.

При длительном транспортировании в стационарные бактериологические лаборатории рекомендуется пользоваться средами с ингибиторами (п.5.1).

Заключение бактериолога дается на основании бактериоскопического, бактериологического и серологического исследования.

5. Методы исследования материала

5.1. Бактериологический метод

Для выделения возбудителя сапа используют мясопептонный агар и бульон рН 6,8-7,0 с 4% глицерина (МПГА, МПГБ). Можно использовать агар на основе гидролизата казеина, а также питательный агар и триптиказосоевый агар (Difco, США).

При использовании “загрязненного” материала (что подтверждается микроскопией) используют среду с ингибиторами:

Исследования на сап лошадей

Цель занятия: изучить основные методы диагностики сапа, мыта, эпизоотического лимфангита и систему противоэпизоотических мероприятий.

Материалы и оборудование: таблицы (сап, мыт, эпизоотический лимфангит), слайды, эпидиоскоп, маллеин, глазные пипетки, ветеринарное законодательство.

Место проведения занятия: аудитория кафедры эпизоотологии.

Сап — опасная болезнь однокопытных, протекающая в основном в хронической форме и передающаяся человеку. Возбудитель — Pseudomonas mallei.

Методы диагностики. Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патолого-анатомических изменений, результатов аллергических и лабораторных исследований (серологических, бактериологических, биологических).

Согласно эпизоотологическим данным в естественных условиях к сапу восприимчивы однокопытные животные (лошади, ослы, мулы, лошаки), реже — верблюды. Очень чувствительны хищники из семейства кошачьих (львы, тигры, рыси, пантеры и т. д.), медведи. Хищники заражаются при поедании мяса, контаминированного возбудителем сапа. Болезнь встречается в виде спорадии или эпизоотии. Сезонность нехарактерна, но сап чаще регистрируют в осенне-зимний период. Пути заражения: алиментарный, контактный, аэрогенный, а также при случке животных.

Клинические признаки проявляются через 1 месяц после заражения и позже. Различают носовую, легочную и кожную формы сапа. У больных животных отмечают высокую температуру (41…42 °С), слабый пульс, частое прерывистое дыхание. На слизистой дыхательных путей появляются мелкие желтоватые узелки, окруженные красным ободком, в дальнейшем узелки подвергаются некротическому распаду и на их месте образуются язвы — круглые или овальные с неровными краями. Дно язв саловидное, покрытое гнойным экссудатом.

Патологоанатомические изменения находят в легких, печени, селезенке, лимфатических узлах, на слизистой оболочке носовой полости и на коже. Специфические узелки в легких могут быть на различной стадии развития: в острых случаях узелки стекловидные или серовато-белого цвета, окружены красным пояском гиперемии, а в хронических — инкапсулированы и пропитаны солями извести.

Для аллергической диагностики сапа применяют маллеиновую пробу (глазную, подкожную и внутрикожную).

Глазную пробу считают основным методом диагностики сапа у лошадей (верблюдам аллерген вводят внутривенно). Пробу выполняют двукратно с промежутком 5…6 дней. На конъюнктиву здорового глаза утром наносят 3…4 капли маллеина. Реакцию учитывают через 3, 6, 9 и 24 ч.

Офтальмопробу считают положительной при развитии гнойного конъюнктивита. Конъюнктива интенсивно краснеет, набухает. Веки припухшие, глаз закрыт. В глазной щели, по краям нижнего века, появляется шнурок гноя, спускающийся с внутреннего угла глаза (рис. 14). Наряду с этим у некоторых лошадей отмечают се-

Розно-гнойное истечение из ноздри. Реакцию считают сомнительной при интенсивном покраснении конъюнктивы, припухлости век и слезотечении. Во внутреннем углу глаза появляется незначительное количество (капля) гноя. При отрицательном результате офтальмопробы глаз остается нормальным или обнаруживают легкое покраснение конъюнктивы и слезотечение. В случае сомнительной реакции пробу повторяют через 5…6дней, нанося аллерген на конъюнктиву того же глаза. Повторная реакция проявляется через 2…5 ч и обычно бывает более резко.

Подкожную пробу применяют при заболевании глаз, а также при неясных показаниях глазной пробы. За 1 сут до введения маллеина у лошади определяют среднесуточную температуру тела, которая не должна превышать 38,5 °С.

Рис. 14. Положительный результат офтальмопробы при сапе (пояснение в тексте).

Для удобства наблюдения за температурной реакцией 1 мл маллеина вводят вечером (в 22…24 ч) в подкожную клетчатку в области подгрудка или шеи. Температуру тела начинают измерять на другой день: в 6 ч утра, т. е. через 6…8 ч после введения препарата, затем каждые 2 ч до 20 ч и, наконец, через 24 и 36 ч после введения аллергена. Исследуемую лошадь в течение 20 ч запрещается поить холодной водой. Реакцию считают положительной, если отмечен типичный подъем температуры до 40 °С и выше.

Внутрикожную пробу применяют в основном для полудиких табунных лошадей. Маллеин вводят в области шеи в дозе 0,2 мл. Реакцию учитывают через 48 ч. Пробу считают положительной, если на месте введения маллеина развивается строго очерченная, горячая, болезненная припухлость тестоватой консистенции размером 2х 3,5 см и больше.

Основной метод лабораторной диагностики сапа — серологический (РА); другие методы (микроскопический, бактериологический, биологический и гистологический) используют при необходимости. С помощью РА исследуют животных, давших положительную реакцию на маллеин.

Диагноз считают установленным при обнаружении характерных для сапа изменений во внутренних органах, выделении культуры возбудителя (P. Mallei), положительной биопробе.

Профилактические и оздоровительные мероприятия. Для профилактики болезни все ввозимое в страну поголовье лошадей содержат в карантине в течение 30 дней с исследованием в этот период клиническим, аллергическим (офтальмопробой) и серологическим методами (РА). Всех взрослых лошадей на территории страны ежегодно исследуют на сап клинически и серологически. В сомнительных случаях прибегают к аллергическому, патологоанатомическому и бактериологическому исследованиям. Исследование лошадей на сап аллергическим методом включают в ежегодный план противоэпизоотических мероприятий. Кроме того, всех лошадей, направляемых на убой, за 3 дня до вывоза из хозяйства проверяют на сап офтальмопробой.

Всех лошадей, а также ослов, мулов в хозяйствах, где зарегистрированы случаи заболевания или выделены животные, положительно реагирующие на маллеин исследуют путем клинического осмотра и двукратной офтальмопробой с интервалом 5…6 дней не менее 2 раз в год.

При установлении диагноза на сап карантин накладывают в зависимости от распространения болезни: на отдельные неблагополучные бригады, фермы, конюшни, табуны или хозяйство в целом.

Ветеринарный врач исследует всех лошадей путем клинического осмотра (не реже 1 раза в 3…5 дней) и двукратной маллеинизацией. В зависимости от результатов исследований все конское поголовье неблагополучного хозяйства подразделяют на четыре группы.

Первая группа — явно больные. Всю группу уничтожают без всякого исследования. Заключение о наличии явно больных дает ветеринарный врач. Вскрывать трупы и снимать шкуры запрещается.

Вторая группа — животные с неясными клиническими признаками сапа и положительным или сомнительным результатом офтальмопробы. Животных изолируют и на 5…6-й день повторно исследуют методом офтальмопробы. Кровь лошадей, дающих положительную реакцию, исследуют в РСК. При получении положительного результата лошадь считают больной сапом и уничтожают, а при отрицательной реакции — признают маллеинщиком. Лошадей, у которых на 5…6-й день получен отрицательный или сомнительный результат офтальмопробы, исследуют глазной маллеинизацией еще раз на 15-й день и при получении снова отрицательного результата переводят в четвертую группу. Лошадей, у которых получен на 15-й день положительный или сомнительный результат, исследуют в РСК. При положительном результате лошадь считают больной сапом и уничтожают, а при отрицательном — признают маллеинщиком.

Третья группа — лошади без каких-либо признаков сапа, но с положительным или сомнительным результатом офтальмопробы.

Эту группу также переводят в сапизолятор, где размещают отдельно, на 5…6-й день повторно исследуют с маллеином и в дальнейшем с лошадьми поступают так же, как и в случае со второй группой.

Жеребят-сосунов от кобыл второй и третьей групп переводят в группу маллеинщиков или уничтожают вместе с кобылами. Всем маллеинщикам ставят на шее справа тавро «М» и переводят обязательно в специальное хозяйство — ПКМ (пункт концентрации лошадей маллеинщиков). При нецелесообразности перевода уничтожают.

Четвертая группа — подозреваемые в заражении сапом, т. е. все остальное конское поголовье неблагополучного по сапу хозяйства с отрицательным результатом аллергической пробы.

Каждые 15 дней животных осматривают и исследуют офтальмопробой вплоть до объявления хозяйства благополучным по сапу. Выпасать лошадей разрешают в пределах территории данного хозяйства на обособленном участке. Естественную случку допускают только с жеребцами аналогичной группы или применяют искусственное осеменение.

Дезинфектанты, используемые при сапе: 20%-я взвесь свежегашеной извести; хлорсодержащие препараты, содержащие 3 % активного хлора, 4%-й горячий раствор гидроксида натрия, 5%-й раствор креолина.

Карантин снимают через 45 дней со дня последнего случая выделения лошадей, больных сапом, при получении трехкратных отрицательных результатов офтальмопробы у всего поголовья и после заключительной дезинфекции.

Мыт — острая контагиозная инфекционная болезнь лошадей, вызываемая бактерией Streptococcus equi.

Методы диагностики. Диагноз устанавливают на основании клинико-эпизоотологических и патологоанатомических данных, а также результатов лабораторного исследования.

Согласно эпизоотологическим данным к мыту восприимчивы лошади, ослы, мулы в возрасте от 2 мес до 5 лет. Сезонность нехарактерна. Пути заражения — воздушно-капельный, контактный и алиментарный.

Клинические признаки зависят от формы болезни. Различают типичную, абортивную, метастатическую и генитальную формы мыта. Инкубационный период 4…8 дней.

При патологоанатомическом исследовании обнаруживают ката-рально-гнойный ринит, фарингит, гнойный лимфаденит, перитонит, плеврит и перикардит.

Лабораторные исследования включают в себя микроскопию мазков из исходного материала, посевы на питательные среды и при необходимости биопробу.

Мазки окрашивают по Граму или Романовскому — Гимзе. Возбудитель мыта в мазках из гноя располагается в форме длинных цепочек, а в мазках из крови сердца и органов — одиночно, попарно, иногда короткими цепочками.

Посевы из исходного материала делают в МПБ и на МПА, обогащенные 10 % сыворотки крови лошадей и 1 % глюкозы. Инкубируют в термостате в течение 18…24 ч. При росте возбудителя мыта МПБ мутнеет, в нем появляются пушистые, нежные хлопья, которые в дальнейшем оседают на дно пробирки, а на агаре мытный стрептококк образует мелкие росинчатые слизистые колонии.

Для биопробы используют двух белых мышей, которых заражают подкожно в области спины гноем или культурой в дозе 0,1 мл, суспензией исходного материала или истечениями из носовой полости в дозе 0,5 мл. Зараженные животные погибают через 2…7 дней.

Диагноз на мыт считают установленным:

При обнаружении в мазках из исходного материала стрептококков, характерных для возбудителя данного заболевания (при наличии типичной клинической картины);

Выделении культуры со свойствами, характерными для возбудителя мыта;

Гибели хотя бы одной из двух мышей, зараженных исходным материалом, с последующим выделением из нее культуры со свойствами, характерными для возбудителя мыта, если даже в посевах из исходного материала культуры возбудитель не выделен.

Профилактические и оздоровительные мероприятия. Лошадей завозят только в благополучные по мыту хозяйства, с соблюдением профилактического карантина. Жеребят содержат отдельно от взрослого поголовья, ежемесячно осматривают. При содержании и выращивании молодняка соблюдают ветеринарно-санитарные и гигиенические правила, обращая внимание на полноценное кормление и условия водопоя. Конюшни дезинфицируют не реже 2 раз в год.

При появлении мыта всех лошадей неблагополучной конюшни, табуна осматривают с термометрией. Лошадей, больных и подозрительных по заболеванию с повышенной температурой тела, немедленно изолируют и лечат. Всех лошадей переводят на индивидуальные содержание, кормление и водопой. Перевоз и перегруппировка лошадей в период заболевания и в течение 15 дней со дня последнего случая выделения больных запрещаются. Не допускают охлаждения организма животных и использования для водопоя холодной воды. Кормят мягким сеном, корнеплодами и болтушкой из отрубей. При лечении мыта кроме обычного симптоматического лечения рекомендуют применять стрептоцид. Конюшни, в которых находились больные животные, тщательно очищают и дезинфицируют.

Эпизоотический лимфангит — хронически протекающая болезнь однокопытных. Возбудитель — гриб Histoplasma farciminoswn.

Методы диагностики. Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патолого-анатомических изменений и лабораторных исследований.

Согласно эпизоотологическим данным наиболее восприимчивы лошади, мулы, лошаки, реже болеют ослы. Источником возбудителя инфекции служат больные животные, выделяющие возбудителя во внешнюю среду с гноем абсцессов и язв. Механизмы заражения: через поврежденную кожу, иногда при случке, возможны алиментарный и аэрогенный пути. Болезнь проявляется в виде спорадических случаев, редко — в виде эпизоотии, распространяется медленно. Характерна стационарность, наивысшая заболеваемость отмечена осенью и зимой.

Клинические признаки проявляются после длительного инкубационного периода (1…3мес). Болезнь протекает хронически 2…8 мес, иногда более 1 года. Различают доброкачественное и злокачественное течение. Обычно процесс начинается с места травмы.

При доброкачественном течении на коже конечностей, затем в области шеи, головы, холки, спины, реже — мошонки, препуция и видимых слизистых оболочек появляются небольшие плотные узелки размером с просяное зерно или горошину, которые постепенно увеличиваются, размягчаются и вскрываются. На их месте образуются круглые или овальные кратерообразные язвы. В процесс вовлекаются лимфатические сосуды и узлы, по ходу их появляются шнуры и утолщения (лимфангитные фокусы — несколько десятков), которые постепенно рассасываются, и через 2…4 мес животное выздоравливает.

При злокачественном течении болезнь характеризуется образованием на различных участках тела большого числа (до 100) гнойных фокусов, которые в дальнейшем вскрываются, формируя обширные гнойные поверхности. Заживление длительное. Характерны слоновость, лихорадка, истощение. Болезнь продолжается 6…8 мес, часто заканчивается смертью.

При патологоанатомическом исследовании отмечают следующие изменения: труп истощен, на коже множество гнойных фокусов и язв, лимфатические сосуды утолщены и рельефно выражены. В лимфатических узлах абсцессы, свищи. Аналогичные фокусы обнаруживают во всех внутренних органах.

Лабораторные исследования включают в себя микроскопию мазков из исходного материала, посевы на питательные среды.

Мазки окрашивают по Паппенгейму, Романовскому-Гимзе, Новикову или Стерку. В неокрашенных мазках из гноя легко обнаруживают гистоплазмы, а при окраске мазков в протоплазме клеток видны гранулы. В мазках из культуры находят сегментированные мицелиальные нити, которые ветвятся и образуют на концах или посередине округлые двухконтурные хламидоспоры размером 8…10 • 10

Для культивирования гистоплазм используют: МПА, МППА с 2 % глюкозы и 2,5 % глицерина; агар Сабуро с добавлением измельченных тканей лимфатических узлов или зобной железы лошади; сывороточные, яичные и другие среды. Рост обнаруживают через 2…4нед в виде коричнево-желтых точечных колоний, которые в дальнейшем превращаются в сухие наложения.

Профилактические и оздоровительные мероприятия. Тщательно изучают эпизоотологическое состояние хозяйств — поставщиков ремонтных лошадей. Обязательно содержат в профилактическом карантине ввозимое поголовье.

В случае возникновения болезни хозяйство объявляют неблагополучным и вводят карантин. По условиям карантина запрещают лошадей вывозить и ввозить, перегруппировывать, выпасать совместно с животными благополучных ферм, использовать молоко для пищевых целей. Кроме того, запрещены кастрация и случка.

Больных лошадей изолируют и лечат, здоровых — исследуют клиническим методом каждые 5 дней.

Помещения дезинфицируют каждые 15 дней после тщательной механической очистки. Средства и режимы дезинфекции при эпизоотическом лимфангите приведены в таблице 9.

Навоз, подстилку и остатки корма от больных и подозрительных по заболеванию лошадей сжигают.

Карантин снимают через 3 мес после выздоровления или гибели последнего больного животного, заключительного клинического осмотра всего поголовья, механической очистки и заключительной дезинфекции в хозяйстве.

ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

Составить план оздоровительных мероприятий в хозяйстве, неблагополучном по сапу.

Хронический сап лошадей

Биология сапной бациллы, источники возбудителя инфекции. Эпизоотологическая обстановка по сапу в Казахстане. Признаки болезни, течение, симптомы. Порядок исследования на сап лошадей. Мероприятия по ликвидации и профилактике животных, больных сапом.

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

При исследовании вначале осматривают кожный покров животного, разрезают обнаруженные узлы. Затем труп вскрывают без снятия кожи, осматривают слизистые оболочки органов дыхания, обследуют легкие, печень, селезенку, лимфатические узлы головы и других органов.
На слизистых оболочках обнаруживаются узелки, язвы с красным ободком или рубцы, в паренхиматозных органах – светло-серые узелки разной величины, при этом часто изменения наблюдают одновременно и в регионарных лимфатических узлах.

Поражения легких могут быть в виде милиарных узелков, а также в форме мелких и крупных очагов (ацинозная, ацинозно-надозная лобулярная или лобарная пневмания), иногда с кавернами. Обнаруживается также саловидные участки склероза ткани.

Пораженные лимфатические узлы резко увеличены, плотны, могут содержать обызвествленные инкапсулированные узелки, или быть на разрезе однородными, без рисунка, серо-белого цвета. Нередко наблюдается воспаление окружающей узел клетчатки (периаденит) с образованием общего плотного фиброзного узла.

Бактериологическая диагностика включает культуральное и биологическое исследования биоматериала. Для исследования используют подчелюстные, заглоточные, бронхиальные, средостенные лимфатические узлы носовую перегородку, гортань,глотку, трахею, а также измененные участки легкого, печени, селезенки, кожи с подкожной клетчаткой.

Из биоматериала делают высев с помощью пастеровской пипетки с грушей или шприца с длинной тонкой иглой (отдельного для каждого органа) в МБП и на МПА с 2-4% глицерина (МПГБ, МПГА), рН 6,8-7,0.
Посевы инкубируют при температуре (37-38)гр.С. Рост обычно появляется на 2-4 сут.

При росте возбудителя бульон мутнеет, на дне появляется слизистый серо-белый осадок, поднимающийся штопором при встряхивании пробирки; некоторые штаммы образуют пристеночное кольцо или пленку на поверхности бульона.

На агаре возбудитель сапа растет в виде гладких полупрозрачных колоний серовато-белого цвета с перламутровым оттенком, сливающихся затем в слизистой налет на поверхности среды.

Для идентификации возбудителя выделенную культуру микроскопируют, мазки окрашивают по Граму, синькой Леффлера (старой) или по Романовскому-Гимза, пересевают на картофельную среду Павловского, обезжиренное молоко, определяют подвижность в висячей капле, а также исследуют в реакции агглютинации на стеле с сапной сывороткой, взятой в разведении 1:10.

Возбудитель сапа представляет собой тонкие зернистые грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные одиночно или короткими цепочками. При окраске по Романовскому-Гимза и синькой Леффлера отмечают хорошо выраженную зернистость.

При выращивании на картофельной среде Павловского через 2-3 сут. Появляются мелкие полупрозрачные с желтоватым оттенком колонии, которые затем сливаются, образуя слизистый “медовый” налет. Цвет налета меняется от янтарно-желтого в первые 3 сут. Роста до буро-коричневого и красноватого к 6-8 сут.

Возбудитель сапа медленно (на 8-14 сут.) свертывает молоко, неподвижен. Следует отметить значительное выраженное броуновское движение клеток возбудителя в висячей капле.

Большинство штаммов агглютинируется сапной сывороткой.

Выделенную культуру исследуют на биологические свойства.

Из отобранных участков биоматериала одновременно с посевом готовят суспензию путем растирания тканей с физиологическим раствором в ступке с соблюдением условий стерильности и вводят подкожно в области шеи трем хомячкам-самцам в дозе 1 куб.см, или трем морским свинкам-самцам в дозе 3 куб.см.

Выделенную из биоматериала культуру вводят двум хомячкам или двум свинкам в тех же дозах.

Срок наблюдения за зараженными хомячками – 12 суток, морскими свинками – 25 суток.

При наличии в биоматериале возбудителя сапа в месте подкожного введения через 3-4 суток образуется язва с уплотненными краями. Больные животные малоподвижны, у них развивается ринит, конъюнктивит, орхит.
Гибель хомячков при достаточной дозе и вирулентности возбудителя наступвет через 5-7 сут., морских свинок – через 8-17 суток. У морских свинок заболевание может перейти в хроническую форму.

Животных с клиническими признаками болезни усыпляют эфиром, вскрывают и проводят высев из сердца, селезенки, печени, семенников на питательные среды, затем исследуют выделенную культуру, как указано в Аналогично поступают с павшими зараженными животными в легких, семенниках обнаруживают геморрагические и некротические узелки.

Для гистологического исследования берут измененные кусочки органов и тканей, из которых после фиксации готовят срезы на замораживающем микротоме или после заливки целлоидином (парафином).
Срезы окрашивают гематоксилин-эозином и просматривают сначала при малом увеличении (окуляр х 7, объектив х 10), затем при обнаружении узелков рассматривают их при большом увеличении (объектив х 40 – х 60).
Типичной формой сапного изменения является инфекционная грнулема (узелок) специфического строения. В центре развивающегося узелка обнаруживают нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты и эпителиоидные клетки. Дифференцирующим признаком является карипрексис (распад ядер) лейкоцитов.

В стадии инкапсуляции центр узелка представлен глыбчато-зернистым распадом хроматина ядер лейкоцитов и окрашен в темно-синий цвет. Внутренний слой клеточной зоны состоит из эпителиоидных клеток с фибробластами и коллагеновыми волокнами.

Центральная часть обызвествленных узелков окрашена в темно-синий, а некротическая масса – в розовый цвет, Известь выступает в виде глыбок и зерен на общем розовом фоне необызвествленной некротической массы. За соединительтканный капсулой располагаются лимфоидные клетки в виде синеватого ободка.

Помимо узелков, сапные изменения могут проявляться в виде диффузного вопаления с экссудативным и продуктивным акцентом, которое характеризуется наличием очагов лейкоцитарных скоплений с явлениями кариорексиса, или пролиферацией лимфоидных и эпителиоидных клеток.
Изменения слизистой носовой полости могут представлять собой комбинацию узелков, первичных и вторичных язв и рубцов.

При положительном результате хотя бы одного из следующих методов исследования: клинического осмотра, глазной маллеиновой пробы, исследования сыворотки крови в РА или РСК животных считают подозреваемыми в заболевании сапа.

Диагноз на сап считают установленным в следующих случаях:

Положительная маллеиновая проба, подтвержденная результатом патологоанатомического исследования.

Обнаружение характерных для сапа изменений во внутренних органах и тканях.

Выделение культуры из патологического материала со свойствами, характерными для возбудителя сапа.

Получение положительных результатов биологического исследования, даже если культуры возбудителя из исходного материала не выделены.

Носовую форму сапа необходимо отличить от мыта, а кожную — от эпизоотического лимфангита. При мыте развивается гнойное воспаление слизистой оболочки носовой полости без образования язв и происходит абсцедирование подчелюстных лимфоузлов. При микроскопии гноя обнаруживаются мытные стрептококки. При эпизоотическом лимфангите в гное язв обнаруживают криптококков. При всех неясных случаях проводят глазную маллеинизацию.

Лечение животных, больных сапом, запрещено, их уничтожают.

Иммунитет при сапе нестерильный. Попавшие в организм сапные бактерии фагоцитируются нейтрофилами и макрофагами, но фагацитоз при сапе незавершенный, а фагоцитированные бактерии не погибают. Роль гуморальных факторов также незначительная. Основную защитную роль играет способность организма купировать возбудителя в сапных узелках с последующим обызвествлением патологического фокуса. Средств для специфической профилактики сапа нет.

Профилактика и меры борьбы. Всех восприимчивых к сапу животных (лошадей, мулов, ослов, верблюдов) за 2 нед до передачи другим хозяйствам, отправки на выставки, спортивные состязания, перевозки по железной дороге или другим видом транспорта, а также до убоя на мясо подвергают клиническому исследованию на сап и маллеинизации. Вновь поступивших в хозяйство животных содержат в профилактическом карантине, в этот период проводят клинический осмотр и маллеинизацию. Все поголовье однокопытных животных во всех категориях хозяйств подвергают клиническому осмотру на сап и маллеинизации один раз в год.

В случае возникновения сапа хозяйство (ферму) объявляют неблагополучным и накладывают карантин. Запрещают передачу однокопытных животных другим хозяйствам, вывоз фуража, перегруппировку лошадей внутри хозяйства, а также убой восприимчивых животных на мясо. Животных с характерными для сапа клиническими признаками, а также не имеющих клинических признаков болезни, но положительно реагирующих на маллеин, признают больными сапом, немедленно изолируют и уничтожают вместе с кожей.

Животных, подозреваемых в заражении, через каждые 15 дней исследуют на сап методом глазной маллеинизации до получения трехкратных отрицательных результатов по всей группе. Клинические осмотры проводят раз в 5 дней. Организуют для них индивидуальное кормление и водопой. Проводят механическую очистку и дезинфекцию неблагополучных помещений и территории вокруг них. Навоз, подстилку и остатки корма из помещений, откуда были выделены больные животные, сжигают. Навоз от животных, подозреваемых в заражении, подвергают биотермической обработке в течение 2 мес. Текущую дезинфекцию проводят через каждые 15 дней (после каждой маллеинизации), а в изоляторах, где содержатся больные животные, — каждый день.

Дезинфекцию проводят 3 %-ным р-ром формалина, 3 %-ным горячим (70 °С) раствором едкого натра, взвесью хлорной извести, содержащей 3 % активного хлора.

Оценка статьи:

(пока оценок нет)

Загрузка...

Сохранить себе в: